For citation:
Vorobyova S. A., Gaeva A. V., Durakova O. S., Kritsky A. A., Gromova O. V., Volokh O. A. Evaluation of ctxA gene expression of Vibrio cholerae strain 569B in the production of cholera vaccine. Izvestiya of Saratov University. Chemistry. Biology. Ecology, 2022, vol. 22, iss. 3, pp. 331-336. DOI: 10.18500/1816-9775-2022-22-3-331-336
Evaluation of ctxA gene expression of Vibrio cholerae strain 569B in the production of cholera vaccine
Cultivation of production strains of Vibrio cholerae is one of the most important stages in the production of cholera bivalent chemical vaccines. In the production of immunobiological preparations, it is necessary to use producer strains with stable properties that persist in a number of generations. The aim of this study was to evaluate the expression of the ctxA gene using molecular genetic methods of the V. cholerae 569B producing strain. By PCR with electrophoretic accounting of the results, the presence of this strain of the ctxA gene in the chromosome was established. The expression of this gene in all hourly samples of culture fluid was recorded by the method of PCR with reverse transcription, taking into account the results in real time and digital drip PCR. Immunochemical methods confirmed the presence of cholera toxin in the samples, with a maximum mark at the ninth hour, which corresponded to the maximum indicators of the “concentration of microbial cells”. Thus, molecular genetic methods have shown the stability of the production strain V. cholerae 569B in samples of 4 independent cultivations.
- Москвитина Э. А., Янович Е. Г., Куриленко М. Л., Кругликов В. Д., Титова С. В., Левченко Д. А., Водопьянов А. С., Лопатин А. А., Иванова С. М., Мишанькин Б. М., Кривенко А. С., Анисимова Г. Б., Носков А. К. Холера: мониторинг эпидемиологической обстановки в мире и России (2010–2019 гг.). Прогноз на 2020 год // Проблемы особо опасных инфекций. 2020. № 2. С. 38–47. https://doi.org/10.21055/0370-1069- 2020-2-38-47.
- Носков А. К., Кругликов В. Д., Москвитина Э. А., Монахова Е. В., Левченко Д. А., Янович Е. Г., Водопьянов А. С., Писанов Р. В., Непомнящая Н. Б., Ежова М. И., Подойницына О. А. Характеристика эпидемиологической ситуации по холере в мире и в Российской Федерации в 2020 г. и прогноз на 2021 год // Проблемы особо опасных инфекций. 2021. № 1. С. 43–51. https://doi.org/10.21055/0370-1069- 2021-1-43-51
- WHO. Weekly Epidemiological Record. 2018. Vol. 93, № 38. P. 489–500.
- Приказ Минздрава России от 16.12.2021 г. № 1122н «Об утверждении национального календаря профилактических прививок, календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям и порядка проведения профилактических прививок». URL: https://docs.cntd.ru/document/727605537 (дата обращения: 25.02.2022).
- Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств, утв. приказом Министерства промышленности и торговли РФ от 14 июня 2013 г. № 916 (ред. от 18.12.2015). URL: https:// docs.cntd.ru/document/499029882 (дата обращения: 25.02.2022).
- Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 77 «Об утверждении Правил надлежащей производственной практики Евразийского экономического союза». URL: https:// docs.cntd.ru/document/456026099 (дата обращения: 25.02.2022).
- Заднова С. П. Комплексная гено- и иммунодиагностическая тест-система для идентификации холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп и оценки их вирулентности. Пат. РФ № 2404257, опубл. 20.11.2010. Бюл. № 32.
- Абдрашитова А. С., Яцышина С. Б., Осина Н. А., Астахова Т. С., Портенко С. А., Саяпина Л. В., Шипулин Г. А., Щербакова С. А. Разработка мультилокусных амплификационных тест-систем для выявления ускоренной идентификации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов // Биозащита и биобезопасность. 2014. Т. 6, № 2. С. 34–41.
- Плеханов Н. А., Заднова С. П., Агафонов Д. А., Смирнова Н. И. Конструирование мультиплексной ПЦР для идентификации токсигенных штаммов генетических вариантов Vibrio cholerae Эльтор и их дифференциации по эпидемическому потенциалу // Биотехнология. 2015. Т. 31, № 2. С. 82–90.
- Jin D., Luo Y., Zheng M., Li H., Zhang J., Stampfl M., Xu X., Ding G., Zhang Y., Tangb Y. W. Quantitative detection of Vibrio cholera toxin by real-time and dynamic cytotoxicity monitoring // Journal of Clinical Microbiology. 2013. Vol. 51, № 12. P. 3968–3974.
- Nasreen T., Hussain A. S., Islam M. T., Orata F. D., Kirchberger P. C., Alam M., Yanow S. K., Yann F. Simultaneous quantifi cation of Vibrio metoecus and Vibrio cholerae with its O1 serogroup and toxigenic subpopulations in environmental reservoirs // Pathogens. 2020. Vol. 9, № 12. P. 1053.
- Крицкий А. А., Челдышова Н. Б., Тучков И. В., Смирнова Н. И. Разработка алгоритма определения уровня экспрессии генов ctxA и toxR Vibrio cholerae методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени // Проблемы особо опасных инфекций. 2017. Т. 3. С. 53–57.