Cite this article as:

Filip’echeva Y. A., Telesheva E. M., Yevstigneyeva S. S., Shelud’ko A. V., Ponomareva E. G., Ponomareva E. G., Katsy E. I. On the Contribution of Cell Aggregation and Extracellular DNA to Biofilm Formation and Stabilization in Azospirillum brasilense Bacteria. Izvestiya of Saratov University. Chemistry. Biology. Ecology, 2018, vol. 18, iss. 4, pp. 399-406. DOI:

This is an open access article distributed under the terms of Creative Commons Attribution 4.0 International License (CC-BY 4.0).

On the Contribution of Cell Aggregation and Extracellular DNA to Biofilm Formation and Stabilization in Azospirillum brasilense Bacteria


Little is known about the functions of the principal matrix components and about the role of cell surface structures in the formation and stabilization of Azospirillum biofilms. It is known that as compared with A. brasilense strain Sp245, its flhB1, fabG1, and mmsB1 mutants, defective in flagellar assembly, form biofilms less well. We made comparative study of bacterial aggregation, biofilm formation, and the effect of DNAase on biofilms. The results show that in planktonic culture, cell aggregation determines the initial stages in biofilm formation but does not contribute to biomass growth in mature films (observed most clearly with the mutants). Extracellular DNA is part of a multicomponent system that ensures the affinity of biofilms to physicochemically different surfaces and the structural integrity of biofilms.


1. Fibach-Paldi S., Burdman S., Okon Y. Key physiological properties contributing to rhizosphere adaptation and plant growth promoting abilities of Azospirillum brasilense // FEMS Microbiol. Lett. 2012. Vol. 326, № 2. P. 99–108.

2. Bogino P. C., Oliva M. M., Sorroche F. G., Giordano W. The role of bacterial biofi lms and surface components in plant-bacterial associations // Intern. J. Mol. Sci. 2013. Vol. 14. P. 15838–15859.

3. Шелудько А. В., Кулибякина О. В., Широков А. А., Петрова Л. П., Матора Л. Ю., Кацы Е. И. Влияние мутаций в синтезе липополисахаридов и полисахаридов, связывающих калькофлуор, на формирование биопленок Azospirillum brasilense // Микробиология. 2008. Т. 77, № 3. C. 358–363.

4. Шелудько А. В., Филипьечева Ю. А., Шумилова Е. М., Хлебцов Б. Н., Буров А. М., Петрова Л. П., Кацы Е. И. Изменения в формировании биопленок у fl hB1 мутанта бактерии Azospirillum brasilense Sp245, лишенного жгутиков // Микробиология. 2015. Т. 84, № 2. C. 175–183.

5. Шумилова Е. М., Шелудько А. В., Филипьечева Ю. А., Евстигнеева С. С., Пономарева Е. Г., Петрова Л. П., Кацы Е. И. Изменение свойств клеточной поверхности и эффективности формирования биопленок у мутантов бактерии Azospirillum brasilense Sp245 по предполагаемым генам липидного метаболизма mmsB1 и fabG1 // Микробиология. 2016. Т. 85, № 2. С. 162–170.

6. Телешева Е. М., Синякин Д. Н., Шелудько А. В., Филипьечева Ю. А., Пономарева Е. Г., Петрова Л. П., Кацы Е. И. Анализ влияния протеаз на структуру биопленок штамма Azospirillum brasilense Sp245 и его дефектных по жгутикованию mmsB1 и fabG1 мутантов // Изв. Сарат. ун-та. Нов. сер. Сер. Химия. Биология. Экология. 2017. Т. 17, вып. 3. С. 322–327.

7. Frølund B., Palmgren R., Keiding K., Nielsen P. H. Extraction of extracellular polymers from activated sludge using a cation exchange resin // Water Res. 1996. Vol. 30. P. 1749–1758.

8. Molin S., Tolker-Nielsen T. Gene transfer occurs with enhanced effi ciency in biofi lms and induces enhanced stabilisation of the biofilm structure // Curr. Opin. Biotechnol. 2003. Vol. 14. P. 255–261.

9. Watanabe M. Growth and fl occulation of a marine photosynthetic bacterium Rhodovulum sp. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1998. Vol. 50. P. 682–691.

10. Ramírez-Mata A., López-Lara L. I., Xiqui-Vázquez L., Jijón-Moreno S., Romero-Osorio A., Baca B. E. The cyclic-di-GMP diguanylate cyclase CdgA has a role in biofilm formation and exopolysaccharide production in Azospirillum brasilense // Res. in Microbiol. 2016. Vol. 167. P. 190–201.

11. Madi L., Henis Y. Aggregation in Azospirillum brasilense Cd : conditions and factors involved in cell–to cell adhesion // Plant Soil. 1989. Vol. 115, № 1. P. 89–98.

12. Никитина В. Е., Пономарева Е. Г., Аленькина С. А., Коннова С. А. Участие бактериальных лектинов клеточной поверхности в агрегации азоспирилл // Микробиология. 2001. Т. 70, № 4. С. 471–476.

13. Ковтунов Е. А., Петрова Л. П., Шелудько А. В., Кацы Е. И. Инсерция транспозона в хромосомную копию гена fl hB сопровождается деф ектами в образовании полярного и латер альных жгутиков у бактерий Azospirillum brasilense Sp245 // Генетика. 2013. Т. 49, № 8. С. 1013–1016.

14. Ковтунов Е. А., Шелудько А. В., Чернышова М. П., Петрова Л. П., Кацы Е. И. Мутанты бактерии Azospirillum brasilense Sp245 со вставкой омегона в генах липидного метаболизма mmsB или fabG дефектны по подвижности и жгутикованию // Генетика. 2013. Т. 49, № 11. С. 1270–1275.

15. Baldani V. L. D., Baldani J. I., Döbereiner J. Effects of Azospirillum inoculation on root infection and nitrogen incorporation in wheat // Can. J. Microbiol. 1983. Vol. 29, № 8. P. 924–929.

16. Döbereiner J., Day J. M. Associative symbiosis in tropical grass: Characterization of microorganisms and dinitrogen fi xing sites // Symposium on Nitrogen Fixation / eds. W. E. Newton, C. J. Nijmans. Pullman : Washington State University Press, 1976. P. 518–538.

17. Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. Molecular Cloning : a Laboratory Manual. 2nd ed. Cold Spring Harbor : Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

18. Wang D., Xu A., Elmerich C., Ma L. Z. Biofi lm formation enables free-living nitrogen-fi xing rhizobacteria to fi x nitrogen under aerobic conditions // ISME J. 2017. Vol. 11. P. 1602–1613.

19. Croes C. L., Moens S., Bastelaere E. van, Vanderleyden J., Michiels K. W. The polar fl agellum mediates Azospirillum brasilense adsorption to wheat roots // J. Gen. Microbiol. 1993. Vol. 139, № 9. P. 2261–2269.

20. Dufrene Y. E., Rouxhet P. C. Surface composition, surface properties and adhesiveness of Azospirillum brasilense – variation during growth // Can. J. Microbiol. 1996. Vol. 42. P. 548–556.

Short text (in English): 
Full text (in Russian):